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La fresque, extraite du cycle de la vie du Christ de la Chapelle Sixtine, est située dans le sixième compartiment du mur nord. Cette scène est moins mouvementée que les autres fresques du cycle, mais le calice, mis en valeur sur la table devant le Christ, souligne l'institution du sacrement de l'Eucharistie et, par conséquent, le symbole de la Nouvelle Alliance entre Dieu et l'humanité.
À l'arrière-plan, trois tableaux sont peints : le Christ priant sur le mont des Oliviers, l'Arrestation du Christ et la Crucifixion. Ces deux derniers sont l'œuvre de Biagio d'Antonio Tucci, peintre florentin qui aida Cosimo Rosselli à réaliser la Cène.